使用奧林巴斯 CX33 顯微鏡觀察化妝品顆粒時，需結合其正置顯微鏡的特性及化妝品樣品的多樣性，從樣品預處理到顯微成像分析進行系統性操作。以下是詳細流程與注意要點：

一、奧林巴斯 CX33 顯微鏡樣品預處理：根據化妝品類型選擇合適方法

1. 液態 / 乳霜狀化妝品（如精華液、乳液）

稀釋處理：若樣品黏稠度高，用無菌 PBS 緩沖液或生理鹽水按 1:10 - 1:100 比例稀釋，避免顆粒聚集。

過濾富集：通過 0.45 μm 濾膜過濾稀釋液，將顆粒截留于濾膜表面，提高觀察效率（適用于微米級顆粒）。

制片技巧：取濾膜或稀釋液滴于載玻片，加蓋蓋玻片時從一側緩慢放下，避免氣泡產生。

2. 固態 / 粉體類化妝品（如散粉、眼影）

分散處理：將少量粉體置于載玻片，滴加無水乙醇或液體石蠟（防止靜電團聚），用牙簽輕輕攪勻。

超聲輔助：若顆粒結塊，可將樣品懸液放入超聲儀中處理 1 - 2 分鐘，使其均勻分散。

過篩分級：通過不同孔徑篩網（如 10 μm、50 μm）篩分顆粒，分離出目標尺寸范圍的樣品觀察。

3. 特殊樣品（含熒光顆粒或納米材料）

熒光標記：若顆粒本身無熒光，可使用熒光染料（如羅丹明 B）染色，或利用納米顆粒的表面修飾熒光基團直接觀察。

負染色法：用磷鎢酸（2% 濃度）對納米顆粒染色，增強對比度（適用于透射電鏡觀察前的預篩選）。

二、奧林巴斯 CX33 顯微鏡操作設置

1. 光源與光路優化

白光觀察模式：

開啟 30W 鹵素燈，通過柯勒照明系統調節聚光鏡和孔徑光闌，使光線均勻覆蓋樣品（亮度以顆粒邊緣清晰為宜）。

對透明顆粒可切換至相襯（PH）模式，利用光程差增強對比度；對不透明顆粒用明場（BF）模式。

熒光觀察模式（若含熒光顆粒）：

根據熒光顆粒的激發波長選擇濾光片組，例如：

綠色熒光顆粒：選用藍光激發通道（BP470 - 490nm），發射光 BP510 - 550nm；

紅色熒光顆粒：選用綠光激發通道（BP530 - 550nm），發射光 BP570 - 620nm。

調節光闌孔徑至 50% - 70%，避免強光導致熒光淬滅。

2. 物鏡選擇與對焦

低倍物鏡（4X/10X）：初步掃描樣品，觀察顆粒分布密度、大致尺寸及團聚情況。

高倍物鏡（40X/100X 油鏡）：定位目標顆粒后切換，使用油鏡時滴加香柏油，通過微調焦旋鈕獲取清晰圖像（注意避免鏡頭壓碎玻片）。

三、奧林巴斯 CX33 顯微鏡觀察內容與分析要點

1. 顆粒形態與尺寸測量

形態特征：記錄顆粒形狀（球形、片狀、針狀等）、表面光滑度、有無破損或團聚現象。例如：

納米級二氧化鈦顆粒常呈球形，分散良好時邊緣清晰；若團聚則呈不規則團塊。

尺寸量化：利用顯微鏡配套軟件（如 CellSens）的標尺功能，測量顆粒長徑、短徑，統計粒徑分布（建議測量≥100 個顆粒）。

2. 成分與結構分析（結合輔助技術）

熒光顆粒定位：若顆粒標記熒光，觀察熒光分布是否均勻（如包裹型脂質體顆粒可能呈現邊緣熒光增強）。

折射率差異：通過偏光模式觀察顆粒雙折射現象（如云母粉體在偏光下呈現彩色干涉條紋），輔助判斷礦物成分。

3. 化妝品顆粒的功能性評估

分散穩定性：觀察靜置不同時間后顆粒是否沉降、聚集，評估配方穩定性（如乳液中的活性成分載體顆粒）。

表面修飾效果：對比未經處理與表面包覆（如硅烷偶聯劑修飾）的顆粒，觀察分散性或熒光強度變化（適用于納米載藥顆粒）。

四、LV2000顯微鏡相機圖像記錄與數據處理

多通道成像：同時采集白光與熒光圖像，通過軟件疊加分析顆粒分布與熒光標記的相關性。

統計分析：使用 ImageJ 或 Excel 對顆粒尺寸、形態進行分類統計，繪制粒徑分布直方圖（如 D10、D50、D90 參數）。

對比實驗：設置對照組（如未處理樣品 vs. 處理后樣品），量化分析工藝（如研磨、超聲）對顆粒特性的影響。

五、奧林巴斯 CX33 顯微鏡注意事項

樣品污染控制：

所有器材（載玻片、鑷子）需經乙醇消毒，避免外界雜質干擾觀察。

液態樣品若含防腐劑（如苯氧乙醇），可能影響顆粒形態，建議預處理時用透析袋去除。

鏡頭維護：

油鏡使用后立即用鏡頭紙蘸取二甲苯擦拭，避免香柏油固化損傷鏡頭。

安全防護：

若樣品含刺激性成分（如高濃度酸 / 堿），需佩戴手套操作，觀察后及時清洗載物臺。

六、奧林巴斯 CX33 顯微鏡延伸應用：結合其他技術深度分析

聯用掃描電鏡（SEM）：對 CX33 觀察到的典型顆粒進一步用 SEM 表征表面微觀結構（如孔隙率、粗糙度）。

拉曼光譜分析：在顯微鏡下定位顆粒后，聯用拉曼光譜儀檢測化學成分（如區分有機顏料與無機粉體）。

通過上述方法，可利用奧林巴斯 CX33 的高分辨率與熒光成像能力，實現對化妝品顆粒的形態、尺寸及功能性的系統分析，為配方優化、質量控制提供可視化數據支撐。